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ATCC細胞解凍和培養(yǎng)指南
點擊次數(shù):1979 更新時間:2019-06-10

細胞解凍和培養(yǎng)指南

凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后,可以立即解凍復(fù)蘇,去除二甲基亞砜(DMSO)后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會迅速下降。

 

 

操作推薦

ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。

檢查包裝,查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應(yīng)處于固體狀。

將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,立即復(fù)蘇培養(yǎng),或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲。

凍存細胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

1、先準(zhǔn)備好細胞培養(yǎng)皿或細胞培養(yǎng)瓶,及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒毎囵B(yǎng)基。(請參閱:注1)

2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快,大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)將細胞凍存管取出水浴。

3、在水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布拭干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

4、小心擰開凍存管的頂部,將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125xg),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。

5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱,在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行孵育。細胞培養(yǎng)24小時后應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。(請參閱:注2)

*注1:雖然大多數(shù)細胞株可以在一種以上的培養(yǎng)基中生長,但細胞的特征有可能會在更換不同培養(yǎng)基時發(fā)生。為保證好的效果,請從細胞培養(yǎng)一開始就使用ATCC推薦的培養(yǎng)基。

*注2:某些細胞株,如雜交瘤株,可能需要幾天的時間才從凍存狀態(tài)下*恢復(fù)正常生長。在細胞復(fù)蘇培養(yǎng)天可能會呈現(xiàn)較低的細胞活力并產(chǎn)生一些細胞碎片。度過這一時期后,細胞會恢復(fù)并進入指數(shù)增長期。

武漢中昌國研標(biāo)物科技有限公司提示您:

細胞株的生長有兩種狀態(tài),貼壁細胞需要附著在一個表面進行生長(貼壁依賴性),懸浮細胞可在懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下生長(非貼壁依賴)。在細胞單層貼壁生長貨懸浮生長中,都通常遵循四個特征性階段:遲滯期、對數(shù)或指數(shù)期、靜止或平臺期及衰退期。

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